常规病理技术HE染色原理清单

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  所有的学科,都有它的底层逻辑。病理技术作为一门专业学科,其技术原理遵循化学与分子生物学理论逻辑规律。只有弄明白了一个学科的底层逻辑,才能真正做到融会贯通、为我所用。
  直播课程过后,将常规病理技术HE染色原理要点列个清单,方便小伙伴们复习查阅。
        常规病理技术HE染色原理清单
  1苏木色精经过氧化反应后,一个羟基被氧化成为羰基,引发电子云重构成为具有色原的氧化苏木素,氧化苏木素与媒染剂(Al3+/Fe3+)发生螯合反应,氧化苏木素通过配位键与Al3+或Fe3+结合。
  2Al3+或Fe3+作为媒染剂的原理是Al3+或Fe3+外层形成杂化轨道,可以接受外层有孤对电子的原子与其形成配位键结合。
  3通过Al3+杂化轨道的配位键连接,氧化苏木素与DNA的外层磷酸结合,使细胞核内DNA着色。
  4在碱性条件中,蛋白质的侧链羧基电离带负电时,氧化苏木素也可以通过Al3+的配位键蛋白质侧链羧基连接,引起蛋白质对氧化苏木素的着色??梢酝ü档退漳舅厝旧旱膒H值至蛋白质的等电点以下,抑制蛋白质分子中羧基的电离,降低蛋白质分子与氧化苏木素的结合,降低苏木素染色的非特异性背景着色。
  5配位键结合在酸性条件中解离,这是苏木素染色后分化的原理。分化的程度与酸度高低和分化时间相关。分化液酸度越高,配位键解离越迅速;分化时间越长,配位键解离越多。
  6氧化苏木素在酸性条件下呈现红色,中性条件下呈紫色,碱性条件下呈蓝色。这是HE染色流程中“返蓝”的原理。
  7常用的伊红染色液有两种,水溶性曙红Y和醇溶性曙红Y。两种伊红在配制方法和使用流程中都有区别, 两种伊红染色的效果也会有差异。
  8苏木素染色液的配制是氧化反应的过程。配制的关键点为氧化剂的选择、氧化剂与苏木色精质量的配比,配制流程。
  9氧化剂氧化性能的大小通过“氧化还原半反应标准电极电位值”进行评价。氧化性能强的氧化剂常温反应,氧化性能低的氧化剂通过加热促进反应。
常规病理技术HE染色原理清单
        10氧化剂的质量,参考苏木素氧化反应方程式中氧化剂理论值的1/3~1/2进行调整。

责任编辑: 希禾
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