实验专栏丨你真的了解流式细胞术吗?

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        流式细胞仪的工作原理
  在一定的压力下,鞘液带着细胞或者微粒通过喷嘴中心进入到流式照射室,在流式照射室的分析点,激光照射细胞并发生散射和折射,发射出散射光,同时被荧光标记的颗粒发射出荧光。
流式细胞仪中洪实拍图
流式细胞仪中洪实拍图
        散射光和荧光分别被不同的检测器接收,通过光电倍增管将检测到的荧光信号转换成电信号,这些电信号放大后再经过数据化处理输入电脑,供我们进行分析。
  原理如下,一图读懂流式细胞仪:
一图读懂流式细胞仪
        了解了流式细胞仪的原理,最最重要的是,流式细胞术,到底能干什么呢?
  检测细胞表面以及细胞内的各种标志
  流式细胞术可以用来检测细胞表面以及胞内的各种标志,对细胞进行分群鉴定以及各种蛋白表达量高低的比较。
  比如CD3是T细胞的标志、CD19是B细胞的标志、EpCAM是上皮细胞的标志等。不仅仅是免疫细胞,其他的如肿瘤细胞、成纤维细胞、干细胞等都可以用流式细胞术进行检测。实体组织只要经过处理后制成单细胞悬液也能用流式细胞术进行分析和分选。
  如果你是一名临床医生,想比较不同治疗方式的患者预后跟治疗方案有什么关系,想通过外周血进行分析的话,流式细胞术可以派上大用场,比如可检测不同治疗方案的患者其外周免疫格局发生了什么变化。
  检测细胞增殖以及凋亡
  通过标记Ki67、BCL-2、caspases等增殖及凋亡相关基因,流式细胞术可用来检测细胞的增殖以及凋亡。此外还有CFSE、以及PI-annexin V等染料,可用来进行增殖和凋亡分析,在药物对肿瘤影响的研究过程中应用广泛。
  分析细胞周期
  流式细胞术可用来分析细胞周期。细胞核DNA含量随着细胞增殖周期时相的不同而发生变化,用DNA染料进行染色,DNA含量多,荧光信号强,DNA含量少,荧光强度低。通过对细胞瞬间的快速测定,判断细胞所处的细胞周期时相,并分析群体细胞中处于不同周期时相的细胞比例,以研究细胞的周期,DNA复制和染色体倍性等。在肿瘤学研究中尤其常用,可以此来判断药物对肿瘤细胞影响、肿瘤的生长速度与患者预后等。
  疾病诊断中病原生物的检测
  第四、流式细胞术可用于疾病诊断中病原微生物的检测,以及环境中饮用水、湖泊、河流、原油中的微生物和海洋微生物检测等。
  用于农林畜牧养殖业
  流式细胞术还可用于农林畜牧养殖业,如依据DNA含量,用于玉米、向日葵、葡萄等的倍性鉴定,分选X、Y精子以控制家畜性别。
  除了以上最常用的几个方面,还有很多其他的高逼格用法。如流式微球阵列(cytometric bead array)检测可溶性蛋白,也称CBA法,通过不同的CBA试剂盒,将捕获微球包被上不同的抗体,对可溶性蛋白进行检测,类似于今天的luminex法,对于稀有样本的检测具有很大的优势。
  与luminex不同的是,它不需要额外购买检测仪器,只要有流式细胞仪就可以进行检测。小伙伴们根据自己的需要对这一高大上的技术进一步探索吧!

责任编辑: 希禾
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